Tinción negativa

Objetivo

Realizar una tinción negativa para comparar con los demás tipos de tinciones que ya hemos visto previamente y describir algunas ventajas que conlleva esta tinción.

Hipótesis
Si realizamos un tinción negativa entonces se resaltarían los microorganismos y serán mas claros de ver sin tener dificultades de confundir se en el campo visual del microscopio.

Introducción

Tinciones negativas

Tinción negativa es una técnica de microscopía que permite contrastar las muestras mediante una sustancia opaca a los fotones (microscopía óptica) o a los electrones (microscopía electrónica). En el primer caso, se emplea nigrosina o tinta china; para el caso de bacterias que esporulan, esta técnica permite visualizar las esporas como entes refringentes sobre un campo de fondo oscuro. En caso de microscopía electrónica de transmisión, se emplean sustancias de alto número atómico que, por tanto, resultan opacas a los electrones transmitidos. Típicamente, estas sustancias son acetato de uranilo, citrato de plomo omolibdato de amonio. Al electrónico, esta técnica permite visualizar virus, flagelos, bacterias y otros entes de escaso tamaño.

No son una verdadera tinción. Se llaman así porque lo que realmente se tiñe es el fondo sobre el que están los microorganismos apareciendo los microorganismos sin teñir. Se emplea para ver la cápsula de S. pneumoniae y Cryptococcus neoformans en LCR.

Material

• Microscopio
• Muestra de levaduras
• Colorante eosina o negrosina
• Portaobjetos
• Gotero
• Vaso de precipitados

Desarrollo Experimental

 El primer paso es hacer una mezcla 1:1 de lavaduras-colorante. Luego, se debe tomar una gota y adicionarla en un extremo del portaobjetos y se realiza un frotis, se debe de dejar secar la muestra para posteriormente observarla al microscopio.

Resultados

Las fotos dejan ver una gran cantidad de levaduras agrupadas y uno que otro coco aislado, se ven todos como si fueran estrellas en medio de la noche.

Conclusiones

Nuestra opinión de este proceso de tinción es que es el más sencillo de todos los que hicimos, nos pareció además peculiar pues resaltaban muy bien las levaduras pues ahora resaltaba más cuando el fondo era el tincionado.  

Elaborado por: Hernández Dominguez Alfredo y Valverde Hernández Salvador Saúl

Grupo: 606        P7 "Ezequiel A. Chavéz"

Tinción Simple

Objetivo
Aplicar una tinción simple a una muestra de yakul echado a perder y observar los microorganismos que se encuentran en ella comparando las diferencias con la tinción de Gram.

Hipótesis
Si realizamos una tinción simple entonces nuestra muestra se vera de una manera mas clara y resaltada a la hora de verla en el microoscopio

Introducción

Una tinción simple es una solución acuosa o alcohólica de un colorante básico único. Aunque los diferentes colorantes se unen de forma específica a las distintas partes de las células, el propósito principal de una tinción simple es destacar el microorganismo completo para que se vean las formas estructuras celulares básicas. El colorante se aplica al extendido fijado durante un tiempo determinado y luego se lava; a continuación el portaobjetos se seca y se examina. En ocasiones se agrega una sustancia química a la solución para intensificar su coloración; este aditivo se denomina mordiente. Una de las funciones de un mordiente es aumentar la afinidad de una muestra biológica por un colorante; otra es cubrir una estructura (como un flagelo) para darle mayor espesor y facilitar la observación después del teñido. Algunas de las tinciones simples utilizadas con frecuencia en el laboratorio son el azul de metileno, la carbolfucsina, el violeta de genciana (cristal violeta) y la safranina.

Tinción simple de Staphylococcus Aureus

Material

• Microoscopio
• Portaobjetos
• Asa bacteriológica
• Lampara de alcohol
• Agua destilada
• Yakul echado a perder
• IH3OH
• Colorante

Procedimiento

El proceso inicia de manera similar a la tensión de Gram, el asa bacteriológica se calienta para ser estirilizada antes de agarrar una muestra y se fija con ayuda de la lampara de alcohol, y se aplica el IH3OH, después el colorante y secamos y vemos al microscopio.

Resultados

Podemos observar en nuestras muestras que se tiñio de un solo color nuestra muestra concretamente de color azul y gracias a esto es mas fácil enfocar algo y distinguir mejor lo que vemo o queremos ver a través del microscopio. En nuestra muestra seguimos encontrando lactobacilos más que cualquier otro microorganismo.
Conclusión
Este tipo de tinción nos permite tener una mejor muestra hablando en terminos de visibilidad pues así se encuentran mas facíl los organismos que se desean encontrar.

Elaborado por: Hernández Dominguez Alfredo y Valverde Hernández Salvador Saúl
Grupo: 606        P7 "Ezequiel A. Chavéz"

Tinción de Gram

Objetivo

Realizar una tinción de Gram y observar los microorganismos seleccionados por su tipo de membrana y entender qué tipo de microorganismos se encuentran en el yakul echado a perder.

Hipótesis
Si realizamos una tinción de Gram entonces podremos reconocer los dos tipos de membrana que tienen los microrganismos, en concreto las bacterias

Introducción

La tinción de Gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en 1884 y es uno de los procedimientos de tinción más útiles porque permite clasificar las bacterias en dos grandes grupos: grampositivos y gramnegativos.

El colorante violeta y el yodo se combinan en el citoplasma de cada bacteria y lo colorean de violeta oscuro o púrpura. Las bacterias que conservan este color después de haberles agregado el alcohol para decolorarlas se clasifican como grampositivas; las bacterias que pierden el color violeta oscuro después de la decoloración se clasifican como gramnegativas. Como las bacterias gramnegativas son incoloras después del  lavado con el alcohol, dejan de ser visibles. Por ese motivo se les aplica el colorante básico safranina que las convierte en rosadas. Los colorantes como la safranina que tienen un color que contrasta con el colorante primario se denominan colorantes de contraste. Dado que las bacterias grampositivas conservan el colorante violeta original, no son afectadas por el colorante de contraste de safranina.

Material

• Microscopio
• Alcohol
• Lampara de Alcohol
• Piseta
• Porta objetos
• Asa bacteriológica
• Yakul echado a perder
• Agua destilada
• Cristal violeta
• Lugol
• Safranina

Desarrollo Experimental

Lo primero que se debe realizar es esterilizar la asa bacteriológica con ayuda de la lampara de alcohol, despues se debe de tomar una muestra que se pone al porta objetos y se debe de fijar al calor pasandolo sobre la lampara unas cuantas veces, se aplica cristal violeta y se enjuaga con la piseta, después se aplica lugol y se deja reposar 1 minuto al igual que se había hecho con el cristal violeta, se enjuaga la muestra con alcohol y después se aplica safranina, seguido se deja reposar 1 munuto y se limpia con agua destilada, después se seca con papel y se pone al microscopio.

Resultados

Se pueden observar cocos y en mayoría lactobacilos de color rojo por lo tanto decimos que son gramnegativos.

Conclusiones

Este tipo de tinción es muy útil para clasificar las bacterias en dos grandes grupos de acuerdo a las características de su membrana, además es muy fácil de realizar y  practica, además dentro del yakul encontramos una gran cantidad de lactobacilos que se pueden ver claramente en la prueba.

Elaborado por: Hernández Dominguez Alfredo y Valverde Hernández Salvador Saúl

Grupo: 606       P7 "Ezequiel A. Chavéz"  

Observación de Microorganismos Teñidos

Objetivo

A una alícuota de una muestra de agua y/o moho, se le aplicara una gota de un colorante vital para observar los microorganismos en el microscopio

Hipotesis
Si observamos la cantidad de microorganismos que se pueden encontrar en el agua entonces podría aumentar nuestra higiene y nuestro entendimiento sobre la diversidad de microorganismos.

Introducción

Dentro de una gota de agua procedente de un  estanque, se puede observar la gran diversidad existente en el mundo de los seres vivos. Los organismos más comunes pertenecen a alguno de los grupos siguientes:

Protozoario a 10X en agua

1. Cianofíceas. Son seres fotosintéticos y además del pigmento clorofila presentan ficocianina, los cuales no están en cloroplastos, puesto que se trata de células procariotas. Las células de las cianofíceas se pueden presentar aisladas o reunidas en rosarios de mayor o menor número de células.
2. Protozoos. Son unicelulares y se pueden subdividir en tres tipos, atendiendo al modo de locomoción que predomina.
3. Algas. Son organismos vegetales unicelulares o pluricelulares más o menos complejos. Las más comunes en el agua dulce pertenecen a alguno de los siguientes grupos, que se clasifican, sobretodo, atendiendo al color que proporciona la combinación de sus pigmentos.
4. Metazoos. Son animales pluricelulares, con órganos muy diferenciados. Muy abundantes en las aguas dulces y marinas, al formar gran parte del plancton animal o zooplancton. Son un factor primordial en la alimentación de larvas acuáticas de muchos animales, así como de numerosos peces.

Material

• Microscopio
• Pipetas
• Porta y cubre objetos
• Pinzas
• Agua dulce

Desarrollo Experimental

Se coloca una gota de agua sobre un portaobjetos y se pone encima un cubreobjetos, teniendo cuidado de que no se formen burbujas de aire.

Se observa al microscopio, primero con el objetivo de menor aumento y una vez localizado algún microorganismo se utilizan otros objetivos de mayor aumento para verlo con detalle.

Resultados

En las muestras solo se logran observar flagelos

Conclusiones

Después de haber observado la gota de agua podemos imaginar nos el tamaño y la cantidad de microorganimos que encontramos en la naturaleza, de igual manera su diversidad pues dentro de otras muestras se pudo observar hasta protozoarios.

Elaborado por: Hernández Dominguez Alfredo y Valverde Hernández Salvador Saúl
Grupo: 606                P7 "Ezequiel A. Chavéz"